大鼠原代雪旺細(xì)胞專用培養(yǎng)基

注意事項(xiàng)

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細(xì)胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對超凈工作臺進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染，使用前需進(jìn)行無菌檢測。不同細(xì)胞對培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌、真菌等污染檢測。

Connexin-43(Cx43 0.5mgConnexin-43(Cx43) 間隙連接蛋白43(多肽片斷抗原)

CCDC134 Protein Human 重組人 CCDC134 蛋白

CD14重組大鼠 CD14 蛋白 Protein

CLEC6A Protein Mouse 重組小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白

HNMT重組人 HNMT / Histamine N-methyltransferase 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

大鼠蛋酸酶(PP)試劑盒 ，英文名： PP ELISA Kit

Porcine vascular endothelial cell adhesion molecule 1 (VCAM-1/CD106) ELISA Kit 豬血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)試劑盒

病毒通用型核酸試劑盒(熒光PCR法) 48T

CLIAKitforLptn/LTN/XCL1(Humanlymphotactin)ELISAKit人淋巴細(xì)胞趨化因子

通用免疫化學(xué)封閉溶液100毫升

ELISAKitMYO/MB雞肌紅蛋白

血小板衍化生長因子-AB   英文名稱：   plateler-derived growth factor AB   規(guī)格：      英文縮寫：   PDGF-AB

血小板衍化生長因子-BB   英文名稱：   plateler-derived growth factor BB   規(guī)格：      英文縮寫：   PDGF-BB

程序性死亡因子1   英文名稱：   programmed death 1   規(guī)格：      英文縮寫：   PD1

旁分泌的方式分泌血小板源性生長因子受體β   英文名稱：   Platelet-derived growth factor receptor beta   規(guī)格：      英文縮寫：   PDGF Rβ

小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai parietal cell aibody (AGPA/PCA) ELISA Kit 人抗胃壁細(xì)胞抗體(AGPA/PCA)試劑盒

HumanProteoglycan,PGELISAKit 人蛋白聚糖(PG)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforACA-IgGELISAKit大鼠抗心0脂抗體IgG

耶爾森氏菌屬(Yersinia)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增試劑盒20次

MouseOsteoprotegerinLigand,OPGLELISAKit小鼠骨保護(hù)素配體(OPGL)試劑盒規(guī)格：96T/48T

5-三磷酸肌醇受體2抗體

ZIM3蛋白抗體

大鼠原代雪旺細(xì)胞專用培養(yǎng)基CD14重組大鼠 CD14 蛋白 Protein

Connexin-43(Cx43 0.5mgConnexin-43(Cx43) 間隙連接蛋白43(多肽片斷抗原)

HNMT重組人 HNMT / Histamine N-methyltransferase 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

CCDC134 Protein Human 重組人 CCDC134 蛋白

CLEC6A Protein Mouse 重組小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白