小鼠原代角膜基質(zhì)細胞專用培養(yǎng)基

小鼠原代角膜基質(zhì)細胞培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持小鼠原代角膜基質(zhì)細胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含小鼠原代角膜基質(zhì)細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于小鼠原代角膜基質(zhì)細胞的培養(yǎng)。

注意事項

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

?無菌操作?：細胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。

OXR (Orexin receptor 0.5mgOXR (Orexin receptor) 食欲素受體(多肽)

IL17RB Protein Human 重組人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (Fc 標簽)

TNF重組雪貂 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein

SERPINA1A Protein Mouse 重組小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 蛋白 (Fc 標簽)

SERPINB2重組人 SerpinB2 / PAI-2 蛋白 (GST 標簽) Protein

大鼠白細胞介素1α(IL-1α)試劑盒 ，英文名： IL-1α ELISA Kit

Lens culinaris agglinin (LCA) ELISA Kit 扁豆凝集素(LCA)試劑盒

Mousegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISAKit 小鼠生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanNon-PhosphorylatedInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1ELISAKit人未0酸化類胰島素生長因子結(jié)合蛋白-1

同位素真菌/酵母細胞蛋白核酸結(jié)合凝膠遷移電泳分析試劑盒20次

ELISAKitsICAM-1大鼠可溶性細胞間粘附分子1

三乙酸   100g

ichloroaceticAcid   500g

N-三(羥甲基)甲基甘酸   500g

icine   100g

豚鼠免疫球蛋白G(IgG)試劑盒 ，英文名： IgG ELISA Kit

Human low density lipoprotein receptor (LDLR) ELISA Kit 人低密度脂蛋白受體(LDLR)試劑盒

MonkeyhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 猴超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBigETELISAKit大鼠大內(nèi)皮素

細菌尿素酶(UREASE)活性化學(xué)發(fā)光法定量試劑盒20次

rabbitleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISAKit兔子白血病抑制因子受體(LIFR)試劑盒規(guī)格：96T/48T

半胱脫硫酶NFS1抗體

淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒Z蛋白抗體

小鼠原代角膜基質(zhì)細胞專用培養(yǎng)基TNF重組雪貂 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein

OXR (Orexin receptor 0.5mgOXR (Orexin receptor) 食欲素受體(多肽)

SERPINB2重組人 SerpinB2 / PAI-2 蛋白 (GST 標簽) Protein

IL17RB Protein Human 重組人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (Fc 標簽)

SERPINA1A Protein Mouse 重組小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 蛋白 (Fc 標簽)