ATP檸檬酸裂解酶(ACL)測試盒微量法

本公司所有產(chǎn)品僅供科學實驗，不做其他科學實驗外的使用！
商品屬性：

測定意義：

ACL(EC4.1.3.8)是脂肪酸合成中的關(guān)鍵酶,其催化產(chǎn)生的乙酰輔酶  可用于脂肪酸合成和碳鏈延長、黃酮類物質(zhì)合成、氨基

測定原理:

ACL 在 ATP 和輔酶  存在的情況下催化檸檬酸裂解為乙酰輔酶 、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸鹽。蘋果酸脫氫酶進一步

NADH 生成蘋果酸和 NAD+,在 340nm 測定 NADH 減少速率,計算 ACL活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存;

試劑三:液體 2μL×1 支,4℃保存;

樣本的前處理:

1、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~10

議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

10min,取上清,置冰上待測。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。

10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測定

(1)工作液的配置,將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中,充分混合溶解,置于 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 5min;(

劑一至試劑二和試劑三中,充分混勻溶解后轉(zhuǎn)移至試劑一瓶中,重復(fù) 2-3 遍);用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融

(2)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本和 190μL 工作液,混勻,立即記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和光值 A2,計算 ΔA=A1-A2。

ACL 活性計算:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清(漿)ACL 活力計算

單位定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

ACL(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=1608×ΔA

2、組織、細菌或細胞中 ACL 活力計算

(1)按樣本蛋白濃度計算

單位定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

ACL(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

單位定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

ACL(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=1608×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位定義:每 1 萬個細胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

ACL(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=3.216×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體

總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù),500 萬。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

1、血清(漿)ACL 活力計算

單位定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

ACL(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=3216×ΔA

2、組織、細菌或細胞中 ACL 活力計算

(1)按樣本蛋白濃度計算

單位定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

ACL(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

單位定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

ACL(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=3216×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位定義:每 1 萬個細胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

ACL(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=6.432×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本

樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù),500 

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據(jù)實驗?zāi)康暮蜋z測對象選擇合適的試劑盒，確保實驗的準確性和可靠性。

嚴格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進行操作，避免誤用或浪費。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進行妥善保存，避免陽光直射、高溫或潮濕等不利因素。

控制實驗條件：在實驗過程中嚴格控制實驗條件，如溫度、時間、pH值等，以確保實驗結(jié)果的穩(wěn)定性。

公司正在出售的產(chǎn)品：

訂購流程:

1、訂購前,請與銷售員核對產(chǎn)品中文名稱/CAS號/英文名稱等。

2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實好下單后即可當天發(fā)貨。(庫存信息以當日為準)如有特殊要求請在發(fā)貨前與銷售員聯(lián)系。

3、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨、快遞代收尾款、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式。

4、質(zhì)量保證,嚴格把關(guān),如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認后可包換包退,免除客戶后顧之憂。

5、我司提供完善的售后服務(wù),使用過程中如有任何疑問,可提供技術(shù)指導(dǎo)。